Transwell迁移和侵袭实验

　　服务介绍：

　　细胞体外侵袭实验主要应用于各种细胞因子对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响及一些抑制血管生成的新药研究，但在具体实验中获得真实、最佳实验结果的图像，并借以说明问题并非简单。Transwell小室(Transwell chamber，Transwell insert)，其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，根据实验需要，可有不同选择。但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1-12.0 µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane)。该实验的主要目的是检测细胞的侵袭和转移能力。

　　迁移实验步骤：

　　1. 消化细胞，用含有1%FBS的培养基重悬细胞，计数，调整细胞悬液浓度至1×105/mL，接种到transwell小室内，每个小室加0.25 mL细胞悬液，下层的24孔板中加入0.75 mL含10%FBS的培养液，置于37℃培养箱中培养48 h;

　　2. 取出培养板，弃去培养基，加入1 mL PBS 清洗一遍，每孔加入1 mL 4%多聚甲醛溶液，室温固定20 min;

　　3. 染色：吸去固定液，用PBS洗涤一次，每孔加入1 mL 0.5%结晶紫溶液，染色30 min后用PBS洗三次，晾干;

　　4. 用棉签小心擦去transwell小室内没有迁移的细胞，用小镊子揭下膜，底面朝上，移至载玻片上用中性树胶封片;

　　5. 计数：置于200×显微镜下观察，计数每个视野中的细胞数;

　　6. 统计分析，计算迁移率。

　　实验结果展示：

　　侵袭实验步骤：

　　1. 接种前在小室中铺100 µL matrigel胶(200-300 μg/mL，用无血清培养基配制)，37 ℃培养箱中放置1 h，取出后如果上层有液态培养基，需小心弃去上层的液态培养基即可使用;

　　附：提前在4 ℃溶胶，配胶、铺胶过程在冰盒上进行

　　2. 消化细胞，用含有1%FBS的培养基重悬细胞，计数，调整细胞悬液浓度至1×105/mL，接种到transwell小室内，每个小室加0.25 mL细胞悬液，下层的24孔板中加入0.75 mL含10%FBS的培养液，置于37℃培养箱中培养48 h;

　　3. 取出培养板，弃去培养基，加入1 mL PBS 清洗一遍，每孔加入1mL 4%多聚甲醛溶液，室温固定20 min;

　　4. 染色：吸去固定液，用PBS洗涤一次，每孔加入1 mL 0.5%结晶紫溶液，染色30 min后用PBS洗三次，晾干;

　　5. 用棉签小心擦去transwell小室内没有迁移的细胞，用小镊子揭下膜，底面朝上，移至载玻片上用中性树胶封片;

　　6. 计数：置于200×显微镜下观察，计数每个视野中的细胞数;

　　7. 统计分析，计算侵袭率。

　　实验结果展示：