细胞划痕实验

　　服务介绍：

　　细胞划痕实验(Wound-Healing Assay)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。“划痕”边缘的细胞会逐渐进入空白区域，并将重新进入细胞周期，增殖直到“划痕”愈合。因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound-Healing Assay)，广泛用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移和修复的影响。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

　　实验步骤：

　　1. 培养板划线标记：用marker笔在6孔板背后画横线(用直尺比着)，每孔至少穿过5条线，每条线均匀且平行。

　　2. 细胞铺板：在孔内接种约5-10×105个细胞(可根据细胞的生长快慢调整接种数量)，原则为过夜后细胞能够长满，切记一定要铺匀。

　　3. 细胞划线：第二天用200 uL无菌枪头，垂直孔板背后的黑线划痕，使划痕与标记线相交。

　　附：减少划痕距离的误差办法——

　　●不同孔之间使用同一只枪头或牙签;

　　●枪头要垂直，不能倾斜，划痕时可比着直尺;

　　●保持力度一致，尽量一次性划完。

　　4. 清洗：PBS洗细胞，去除划下的细胞

　　5. 细胞培养与观察：将细胞放入37℃，5%CO2培养箱中培养。然后在适当的时间点，如0、6、12、24 h后取出细胞板，在显微镜下观察并拍照。

　　6. 数据分析：使用 Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。

　　实验结果展示：