哺乳细胞表达系统

　　哺乳动物细胞生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳定转染。
　　瞬时转染的特点是短期快速表达，满足蛋白的小量制备。而稳定转染通过构建稳定细胞系能够满足蛋白的大量、长期生产。瞬时转染是指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内，该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分裂，外源基因会逐渐丢失。质粒在细胞内能够存在3-4天，此时间内，质粒外源基因在细胞内发生转录翻译，得到极为少量的蛋白。这一整个快速转染得到蛋白的过程就称为瞬时转染表达。

　　图1. 瞬时转染流程简图

　　稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制。对细胞进行稳定转染最终可筛选得到稳定细胞株，稳定细胞株在重组蛋白/抗体生产、基因编辑、功能研究等方面起着重要的作用。
　　从实验流程的角度看，稳定转染是建立在瞬时转染的基础上的：先对哺乳动物细胞进行转染，再对得到的细胞进行筛选最终得到稳定细胞系。在建立稳定转染细胞系时，我们需要使用选择标记来区分瞬时转染和稳定转染，通常质粒中带有选择标记，选择标记会与目的基因共表达，由此可以筛选出阳性克隆（外源基因已稳定整合至细胞的基因组上），同时剔除未稳定整合的细胞。最终通过有限稀释得到稳定转染的单克隆细胞株。