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哺乳细胞表达系统
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哺乳细胞表达系统

  哺乳动物细胞生产蛋白的方式有两种:瞬时转染和稳定转染。  瞬时转染的特点是短期快速表达,满足蛋白的小量制备。而稳定转染通过构建稳定细胞系能够满足蛋白的大量、长期生产。瞬时转染是指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内,该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分裂,外源基因会逐渐...

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  哺乳动物细胞生产蛋白的方式有两种:瞬时转染和稳定转染。
  瞬时转染的特点是短期快速表达,满足蛋白的小量制备。而稳定转染通过构建稳定细胞系能够满足蛋白的大量、长期生产。瞬时转染是指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内,该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分裂,外源基因会逐渐丢失。质粒在细胞内能够存在3-4天,此时间内,质粒外源基因在细胞内发生转录翻译,得到极为少量的蛋白。这一整个快速转染得到蛋白的过程就称为瞬时转染表达。


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  图1. 瞬时转染流程简图

  稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上,使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制。对细胞进行稳定转染最终可筛选得到稳定细胞株,稳定细胞株在重组蛋白/抗体生产、基因编辑、功能研究等方面起着重要的作用。
  从实验流程的角度看,稳定转染是建立在瞬时转染的基础上的:先对哺乳动物细胞进行转染,再对得到的细胞进行筛选最终得到稳定细胞系。在建立稳定转染细胞系时,我们需要使用选择标记来区分瞬时转染和稳定转染,通常质粒中带有选择标记,选择标记会与目的基因共表达,由此可以筛选出阳性克隆(外源基因已稳定整合至细胞的基因组上),同时剔除未稳定整合的细胞。最终通过有限稀释得到稳定转染的单克隆细胞株。

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